無血清細胞凍存液的凍存方式和注意事項

　　無血清細胞凍存液原位凍存方式：從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清吸取干凈，再加入適量細胞凍存液于培養(yǎng)孔板中，充分浸潤細胞，蓋上蓋板，做好密封措施，防止染菌，然后直接將含凍存液的細胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱，冷凍保存。
 

　　無血清細胞凍存液原位復蘇方式：從冰箱取出凍存培養(yǎng)板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。待凍存的細胞懸液*融化后，輕輕吸去細胞凍存液，按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進行培養(yǎng)。
 

　　凍存管凍存方式：按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中，按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞。移去離心管中的上清液，再加入適量細胞凍存液于離心管中，緩慢混合均勻，制成細胞混合液。將離心管中的細胞混合液分裝于已標示的冷凍保存管中，直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，冷凍保存。
 

　　無血清細胞凍存液注意事項：細胞凍存液在凍存細胞分裝后，應減少在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱。選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。對于干細胞(ES細胞)，原代細胞等凍存時，應該事先將所凍存的細胞進行至少為期一周的干產品試驗性細胞凍存培養(yǎng)，確認性能后在進行正式凍存。